SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU
Viscerální leishmanióza neboli Kala-azar je rozšířená infekce způsobená několika poddruhy L. donovani.Podle odhadů Světové zdravotnické organizace (WHO) toto onemocnění postihuje přibližně 12 milionů lidí v 88 zemích.Na člověka se přenáší kousnutím písečných mušek Phlebotomus, které se nakazí krmením infikovanými zvířaty.Ačkoli se jedná o nemoc vyskytující se v chudých zemích v jižní Evropě, stala se hlavní oportunní infekcí u pacientů s AIDS.Identifikace organismu L. donovani z krve, kostní dřeně, jater, lymfatických uzlin nebo sleziny poskytuje jednoznačný způsob diagnózy.Sérologický průkaz anti-L.donovani IgM bylo zjištěno jako vynikající marker pro akutní viscerální leishmaniózu.Testy používané v klinice zahrnují ELISA, fluorescenční protilátky nebo přímé aglutinační testy 4-5.V poslední době použití specifického proteinu L. donovani v testu dramaticky zlepšilo citlivost a specificitu.
Rychlý kombinovaný test Leishmania IgG/IgM je sérologický test na bázi rekombinantních proteinů, který současně detekuje protilátky IgG a IgM proti L. Donovani.Test poskytuje spolehlivý výsledek do 15 minut bez jakýchkoliv přístrojů.
ZÁSADA
Rychlý test Leishmania IgG/IgM je laterální průtoková chromatografická imunoanalýza.Testovací kazeta se skládá z: 1) vínově zbarvené konjugované podložky obsahující rekombinantní antigen L. donovani konjugovaný s koloidním zlatem (konjugáty Leishmania) a konjugáty králičího IgG-zlato, 2) proužek s nitrocelulózovou membránou obsahující dva testovací proužky (proužky T1 a T2) a kontrolní pásmo (pásmo C).Pás T1 je předem potažen monoklonálním anti-lidským IgM pro detekci anti-L.donovani IgM, T2 pás je předem potažen reagenciemi pro detekci anti-L.donovani IgG a C pás je předem potažen kozím anti králičím IgG.
Když se do jamky na vzorek v kazetě nadávkuje adekvátní objem testovacího vzorku, vzorek migruje kapilárním působením přes kazetu.L. donovani IgM, pokud je ve vzorku přítomen, se naváže na konjugáty Leishmania.Imunokomplex je poté zachycen na membráně předem potaženou anti-lidskou IgM protilátkou, čímž se vytvoří vínový pruh T1, což indikuje pozitivní výsledek testu L. donovani IgM.L. donovani IgG, pokud je ve vzorku přítomen, se naváže na konjugáty Leishmania.Imunokomplex je poté zachycen předem potaženými činidly na membráně, čímž se vytvoří vínový pruh T2, což ukazuje na pozitivní výsledek testu L. donovani IgG.
Absence jakýchkoli T pruhů (T1 a T2) naznačuje negativní výsledek.Test obsahuje vnitřní kontrolu (proužek C), který by měl vykazovat vínově zbarvený proužek imunokomplexu kozího anti králičího IgG/králičího IgG-zlatého konjugátu bez ohledu na vývoj barvy na kterémkoli z T proužků.V opačném případě je výsledek testu neplatný a vzorek musí být znovu testován jiným zařízením.
