SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU
Malárie je hemolytické horečnaté onemocnění přenášené komáry, které infikuje více než 200 milionů lidí a ročně zabije více než 1 milion lidí.Je způsobena čtyřmi druhy Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale a P. malariae.Všechny tyto plasmodia infikují a ničí lidské erytrocyty, což způsobuje zimnici, horečku, anémii a splenomegalii.P. falciparum způsobuje závažnější onemocnění než jiné plasmodiální druhy a odpovídá za většinu úmrtí na malárii.P. falciparum a P. vivax jsou nejběžnějšími patogeny, nicméně existují značné geografické rozdíly v rozšíření druhů.
Tradičně je malárie diagnostikována demonstrací organismů na Giemsa obarvených tlustých nátěrech periferní krve a různé druhy plasmodií se odlišují svým výskytem v infikovaných erytrocytech1.Technika je schopna přesné a spolehlivé diagnózy, ale pouze tehdy, je-li prováděna zkušenými mikroskopy pomocí definovaných protokolů2, což představuje velké překážky pro vzdálené a chudé oblasti světa.
Pro řešení těchto překážek je vyvinuta souprava pro rychlý test Malaria Pf / Pan Antigen Rapid Test Kit.Test využívá dvojici monoklonálních a polyklonálních protilátek proti specifickému proteinu P. falciparum, Histidin Repeat Protein II (pHRP-II) a dvojici monoklonálních protilátek proti plasmodium laktátdehydrogenáze (pLDH), proteinu produkovaném čtyřmi druhy plasmodia, a umožňuje tak současnou detekci a diferenciaci dalších tří plasmodium nebo plasmopardií infekce.Může ji provádět nevyškolený nebo minimálně kvalifikovaný personál, bez laboratorního vybavení.
ZÁSADA
Souprava Pf/Pan Malaria Rapid Test je laterální průtoková chromatografická imunoanalýza.Komponenty testovacího proužku se skládají z: 1) vínově zbarveného konjugátu obsahujícího myší protilátku anti-PHRP-II konjugovanou s koloidním zlatem (konjugáty pHRP II-zlato) a myší protilátku anti-pLDH konjugovanou s koloidním zlatem (konjugáty pLDH-zlato),
2) proužek nitrocelulózové membrány obsahující dva testovací proužky (pásy Pan a Pv) a kontrolní proužek (pás C).Pan pás je předem potažen monoklonální anti-pLDH protilátkou, pomocí které lze detekovat infekci kterýmkoli ze čtyř druhů plasmodií, pás Pf je předem potažen polyklonálními protilátkami anti-pHRP-II pro detekci infekce Pf a pás C je potažen kozím anti-myším IgG.
Během testu se do jamky pro vzorek (S) testovací kazety nadávkuje adekvátní objem krevního vzorku, do jamky s pufrem (B) se přidá lyzační pufr.Pufr obsahuje detergent, který lyžuje červené krvinky a uvolňuje různé plasmodiové antigeny, které migrují kapilárním působením přes proužek držený v kazetě.Pokud je pHRP-II přítomen ve vzorku, naváže se na konjugáty pHRP II-zlato.Imunokomplex je poté zachycen na membráně předem potaženými anti-pHRPII protilátkami, čímž se vytvoří vínově zbarvený Pf pás, což indikuje Pf pozitivní výsledek testu.Pokud je pLDH přítomen ve vzorku, naváže se na zlaté konjugáty pLDH.Imunokomplex je poté zachycen na membráně předem potaženou anti pLDH protilátkou, čímž se vytvoří vínově zbarvený Pan pás, indikující plasmodium pozitivní výsledek testu.V nepřítomnosti Pan bandu lze doporučit pozitivní výsledek testu na kterékoli z dalších tří plazmodií.
Absence jakýchkoli testovacích proužků (Pan a Pf) naznačuje negativní výsledek.Test obsahuje vnitřní kontrolu (proužek C), který by měl vykazovat vínově zbarvený proužek imunokomplexu kozího anti-myšího IgG / myšího IgG (konjugáty pHRP-II a pLDH-zlato) bez ohledu na vývoj barvy na kterémkoli z testovacích proužků.V opačném případě je výsledek testu neplatný a vzorek musí být znovu testován jiným zařízením.
